膀胱癌细胞来源外泌体的提取与鉴定

目的:提取并鉴定膀胱癌5637细胞来源外泌体。方法:收集膀胱癌5637细胞培养上清液,采用多步骤离心法提取膀胱癌5637细胞外泌体。透射电子显微镜观察外泌体形态及颗粒直径。Bradford法定量外泌体蛋白含量。蛋白质免疫印迹鉴定外泌体标志蛋白。结果:20 m L 5637细胞培养基可收集约50-80μg外泌体。膀胱癌5637细胞来源外泌体呈典型的茶杯样形态,外泌体颗粒直径大约在30-150 nm。膀胱癌5637细胞外泌体提取物中可检测到标志蛋白CD63、TSG101、Hsp70和Hsp90表达。结论:多步骤离心法可以用于提取膀胱癌5637细胞外泌体,为后续开展膀胱癌5637细胞外泌体作用与机制的研究奠定了基础。     

基因工程菌的构建、性能研究及其在疾病诊断和治疗中的应用

随着肠道微生物组与宿主关系研究的深入和基因工程的迅速发展，基因工程菌（genetically engineered bacteria，GEB）在医学领域的应用成为研究热点。GEB是指经基因工程改造而具有高效表达外源蛋白质或分子化合物能力的细菌，相比传统药物具有诸多优势。GEB的构建过程包括底盘的选择、功能基因的获取、基因转移和重组这几个基本步骤，包裹技术能够提高其存活率和定殖能力，合成基因回路的应用可使其智能化。功能稳定性、有效性和安全性是评价GEB的一般指标，也是性能优化过程中需要重点关注的方面。GEB在炎症性疾病、肿瘤、代谢性疾病、感染性疾病和神经系统疾病等疾病中已有广泛应用，但实现临床转化还有很多问题亟待解决。本文介绍了GEB的构建和性能研究方法，总结了近年来其在疾病诊断和治疗中的应用，指出了现存问题并提出了展望。